بررسی بیان ژن های کد کننده hat1وsuv39h1 در رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده گوسفند (انجماد شیشه ای) به روش semi quantitative-rt-pcr

چکیده: دستیابی به روشی مطمئندر خصوص انجماد تخمک پستانداران، گامی موثر در جهت حفظ باروری درانسان و گونه های جانوری محسوب می شود. از طرفی امکان ابقای منابع ژنتیکی ارزشمنددر گونه های اهلیجانوری و وحوش در حال انقراض با بهره برداری از این تکنیک میسر می گردد. انجماد آهسته روشی است که باعث ایجاد یخ داخل سلولی و شوک اسمزی در تخمک های منجمد شده می شود. در انجماد شیشه ای با افزایش غلظت مواد ضدیخ و سرعت انجماد حساسیت نسبت به سرما کاهش یافته و ضمن جلوگیری از تشکیل بلورهای یخ، آسیب های حاصل از انجماد نیز به حداقل می رسد. در حقیقت غلظت بالای مواد ضدیخ متضمن روند مطلوب انجماد شیشه ای می باشد. افزایش غلظت مواد ضدیخ به دلیل خاصیت سمی آنها اثرات مخربی بر سلول داشته و همچنین سبب بروز آسیب اسمزی می گردد. به منظور غلبه بر این مشکل می توان از انواع بخصوصی از ظروف حامل استفاده نمود. ظرف حامل مورد استفاده در این مطالعه کرایوتاپ بوده است. در این روش با استفاده از حجم بسیار اندک مواد ضدیخ میزان سرمادهی تا بیش از 4000 درجه سانتی گراد در دقیقه افزایش می یابد. در این مطالعه ما اثرات انجماد شیشه ای را در رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده گوسفند، در مرحله تکاملی رویان و پیش از جایگزینی رویان مورد بررسی قرا دادیم. یکی از تغییرات مهم در این مرحله فعال سازی ژنوم رویانی است که در طی این مرحله فعالیت ژنوم رویانی متعاقب رخداد ها اپی ژنتیک آغاز شده و با شروع رونوشت برداری عملا نقش ترانس کریپت های مادری در هدایت رخداد های سلولی به حداقل خواهد رسید. تغییرات اپی ژنتیک شامل طیف نسبتا گسترده ای از تغییرات اعمال شده در سطح مولکول dna و پروتئین های هسته ای (از جمله histon ها) است. از جمله این تغییرات، استیلاسیون و متیلاسیون هیستون هاست. در این مطالعه ژن های موثر در تغییرات در ساختار هیستون hat1 (histon acethyle transfrase) و (histon metyle transfrase)suv39h1مورد بررسی قرار گرفتند که هر دو در تنظیم بیان ژن ها نقش دارند. hat1 به وسیله استیله کردن انتهای n هیستون ها، باعث باز شدن ساختار کروماتین و فراخوانی فاکتور های رونویسی و در نهایت آغاز رونویسی می شود. suv39h1نیز با مشارکت در ساختار هتروکروماتین، نقش در غیر فعال ساختن کروماتین و خاموش ماندن ژن ها دارد. در این مطالعه میزان بیان نسبی ژن های hat1 و suv39h1 در مراحل رویانی 7-2 سلولی، 16-8 سلولی، مورولا و بلاستوسیست در رویان های حاصل از تخمک منجمد و رویان های حاصل از تخمک غیر منجمد با استفاده ازروش real time pcr ارزیابی شد. نتایج حاصله حاکی از آن بود که در تخمک های منجمد در مقایسه با گروه کنترل، بیان ژن های مذکور کاهش نسبی، لیکن غیر معنی دار را نشان می دهد(p<0.05) و در مورد هر 2 ژن روند انجماد باعث کاهش نسبی میزان کلی ترانسکریپت ها شده است اما این کاهش معنی دار نیست. در نهایت می توان نتیجه گیری نمود که روند انجماد شیشه ای تاثیر معنی داری در الگوی بیان2 ژن مذکور نداشته است.